การย่อย DNA อย่างรวดเร็ว 5-15 นาทีเอนไซม์ BsaI Biochemical Reagent CE Approved

เอนไซม์ BsaI

เอ็นไซม์เป็นชุดของเอ็นไซม์จำกัดทางวิศวกรรมสำหรับการย่อย DNA อย่างรวดเร็วใน 5-15 นาทีเอนไซม์สามารถใช้ย่อยพลาสมิด จีโนม และ DNA ของไวรัสได้ เช่นเดียวกับผลิตภัณฑ์ PCRเอนไซม์ทั้งหมดแสดงกิจกรรมที่เหนือกว่าในบัฟเฟอร์สากล ดังนั้นจึงทำให้ระบบปฏิกิริยาการย่อยด้วยเอนไซม์ง่ายขึ้นนอกจากนี้ เอ็นไซม์ยังให้เอ็นไซม์ซ้ำซ้อนที่ยอดเยี่ยม ช่วยให้ย่อยสารตั้งต้นที่มากเกินไปหรือแม่แบบที่ยากได้ง่าย

การขนส่งและการจัดเก็บ

ส่วนประกอบต่างๆ ถูกจัดส่งพร้อมกับแพ็คน้ำแข็งและสามารถเก็บไว้ได้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ปี

ไซต์ตัด

5'-GGTCTC(N)1↓-3'

3'-CCAGAG(N)5↑-5'

เงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยาที่แนะนำ

1× บัฟเฟอร์ FuniCut™;ฟักตัวที่ 37 ℃

การปิดใช้งานความร้อน

ฟักไข่ที่ 80 ℃ เป็นเวลา 20 นาที

ควบคุมคุณภาพ

1. คำจำกัดความของกิจกรรม:1 ไมโครกรัม pPIC9K DNA ถูกย่อยอย่างสมบูรณ์ด้วยเอนไซม์ 1 ไมโครลิตรใน 15 นาทีที่ 37℃ ในปริมาณปฏิกิริยาทั้งหมด 20 ไมโครลิตร

2. การทดสอบการฟักตัวเป็นเวลานาน / การทดสอบกิจกรรมดาว:ไม่มีการย่อยสลายที่ตรวจพบได้ของ 1 ไมโครกรัม pPIC9K DNA เนื่องจากการปนเปื้อนของนิวคลีเอสหรือการทำงานของดาวเกิดขึ้นระหว่างการฟักไข่ด้วย FuniCut™ BsaI 1 ไมโครลิตร เป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 37 ℃การฟักตัวนานขึ้นอาจส่งผลให้เกิดกิจกรรมดาว

3. Ligation and Recleavage (L/R) Assay:หลังจากย่อยด้วยเอนไซม์ 1μL ภายใต้สภาวะที่เหมาะสม ผลิตภัณฑ์รีไซเคิลจากการย่อยสามารถผูกมัดภายใต้ T4 DNA Ligase ที่ 22 ℃ผลิตภัณฑ์ ligation สามารถย่อยสลายได้โดยเอนไซม์

4. กิจกรรมเอนโดนิวคลีเอสที่ไม่เฉพาะเจาะจง:การฟักตัวของเอ็นไซม์ 1 ไมโครลิตรกับพลาสมิด DNA พลาสมิด 1 ไมโครกรัม เป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 37 ℃ ส่งผลให้สภาพของขดลวดยิ่งยวดไม่เปลี่ยนแปลง

คำแนะนำ

1. พิธีสารเพื่อการย่อยเร็วของ DNA ต่างๆ

1.1 รวมส่วนประกอบปฏิกิริยาต่อไปนี้บนน้ำแข็งตามลำดับที่ระบุ:

[หมายเหตุ]: *สำหรับผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์จำนวน 10×บัฟเฟอร์ FuniCut™อาจลดลงเหลือ 2 ไมโครลิตรเนื่องจากความแรงของอิออนที่เหลืออยู่ในผลิตภัณฑ์ PCR ที่ไม่บริสุทธิ์แนะนำให้ใช้ผลิตภัณฑ์ PCR เพื่อทำให้บริสุทธิ์ก่อนการย่อย เมื่อผลิตภัณฑ์ PCR จะถูกใช้สำหรับการโคลน

1.2 ผสมเบา ๆ (ห้ามกระแสน้ำวน) แล้วปั่นลง

1.3 ฟักที่ 37℃ เป็นเวลา 15 นาที (พลาสมิด DNA) หรือ 15-30 นาที (ผลิตภัณฑ์ PCR) หรือ 30-60 นาที (จีโนม DNA)

1.4 ตัวเลือกเสริม: ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์โดยให้ความร้อนเป็นเวลา 20 นาทีที่ 80 ℃

2. การย่อย DNA สองครั้งและหลายครั้ง

2.1 ใช้เอ็นไซม์แต่ละตัว 1 ไมโครลิตร และเพิ่มสภาวะของปฏิกิริยาอย่างเหมาะสม

2.2 ปริมาณรวมของเอนไซม์ในส่วนผสมของปฏิกิริยาไม่ควรเกิน 1/10 ของปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด

2.3 ถ้าเอ็นไซม์ต้องการอุณหภูมิปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน ให้เริ่มด้วยเอ็นไซม์ที่ต้องการอุณหภูมิที่ต่ำกว่า แล้วเพิ่มเอ็นไซม์ตัวที่สองและฟักที่อุณหภูมิสูงขึ้น

3. ปรับขนาดปฏิกิริยาการย่อยของพลาสมิดดีเอ็นเอ

[บันทึก]: การฟักตัวในเทอร์โมสตัทแบบน้ำ เทอร์โมสแตทแบบโลหะ หรือเทอร์โมสแตทแบบทรายเพิ่มเวลาฟักตัวหากปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมดเกิน 20 ไมโครลิตร

จำนวนไซต์ที่ได้รับการยอมรับใน DNA