Universal TaqMan Multiplex QPCR Master Mix รีเอเจนต์ชีวเคมี

Universal TaqMan มัลติเพล็กซ์ qPCR มาสเตอร์มิกซ์

หลักการออกแบบรองพื้น:

1. แนะนำให้ความยาวของผลิตภัณฑ์ขยายเสียงอยู่ระหว่าง 80-300 bp;

2. ความยาวรองพื้น: 18-25 bp;

3. เนื้อหาของเบส G+C ในไพรเมอร์ควรอยู่ระหว่าง 40%-60%

4. ความแตกต่างของค่า Tm ระหว่างไพรเมอร์ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ย้อนกลับน้อยกว่า 2 ℃ และค่า Tm ระหว่าง 58-62 ℃จะดีที่สุด

5. การสุ่มแจกฐาน

6. ไพรเมอร์ดีกว่าไม่มีลำดับเสริมมิฉะนั้นจะสร้างโครงสร้างกิ๊บรอง

7. ระหว่างไพรเมอร์สองไพรเมอร์ ไม่ควรมีเบสเสริมหรือคล้ายคลึงกันเกิน 4 เบส มิฉะนั้น ไพรเมอร์จะก่อตัวขึ้น

8. แนะนำให้ใช้ฐานเทอร์มินัล 3' ของไพรเมอร์เป็น G หรือ C;

9. ไม่พบผลิตภัณฑ์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงอื่นๆ ในผลการเปรียบเทียบ NCBI

การแนะนำ Universal TaqMan มัลติเพล็กซ์ qPCR มาสเตอร์มิกซ์:

ผลิตภัณฑ์นี้เป็นโซลูชันพรีมิกซ์ 2x สำหรับ qPCR โดยใช้วิธีเรืองแสงแบบคิเมริก GSK Green Iองค์ประกอบหลักคือ Taq DNA Polymerase เป็น DNA Polymerase ที่กระตุ้นด้วยความร้อนซึ่งถูกบล็อกโดยวิธีแอนติบอดี ซึ่งสามารถยับยั้งการขยายแบบไม่จำเพาะได้อย่างมีประสิทธิภาพภายใต้สภาวะที่มีอุณหภูมิต่ำในขณะเดียวกัน เมื่อรวมกับบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่ปรับให้เหมาะสมสำหรับ qPCR แล้ว Taq DNA Polymerase นั้นเหมาะสมมากสำหรับปฏิกิริยา qPCR ที่มีความจำเพาะและความไวสูงกราฟมาตรฐานที่ดีสามารถรับได้ในพื้นที่เชิงปริมาณที่กว้าง ซึ่งมีความถูกต้อง ทำซ้ำได้ และเชื่อถือได้สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณของยีนเป้าหมายในเวลาเดียวกัน ผลิตภัณฑ์นี้มี ROX Passive Reference Dye พิเศษซึ่งเหมาะสำหรับใช้ในเครื่องมือ qPCR ทั้งหมด และไม่จำเป็นต้องปรับความเข้มข้นของ ROX ในเครื่องมือต่างๆสีย้อมสีน้ำเงินจะถูกเติมในพรีมิกซ์ ซึ่งมีผลตามรอยในการเพิ่มตัวอย่าง และมีการจัดเตรียมเทมเพลตสีเหลืองให้เจือจางในเวลาเดียวกันเมื่อแม่แบบถูกเจือจางด้วยแม่แบบเจือจางสีเหลืองและเพิ่มลงในพรีมิกซ์ปฏิกิริยาสีน้ำเงิน สีจะเปลี่ยนจากสีน้ำเงินเป็นสีเขียว ซึ่งสามารถมีบทบาทเป็นตัวติดตามในการเตรียมกระบวนการของระบบปฏิกิริยาและป้องกันการรั่วไหลหรือเติมผิดสเปกตรัมของสีย้อมสีน้ำเงินและสีเหลืองไม่ทับซ้อนกับสีย้อม qPCR และไม่ส่งผลต่อผลลัพธ์ของปฏิกิริยา

พิธีสารทดสอบ / ขั้นตอนเกี่ยวกับUniversal TaqMan มัลติเพล็กซ์ qPCR มาสเตอร์มิกซ์:

1. (ไม่บังคับ) แม่แบบการเจือจาง ​:

ชุดอุปกรณ์นี้มีบัฟเฟอร์การเจือจางเทมเพลตสีเหลือง 40x ซึ่งเป็นการเจือจางเทมเพลตสีเหลืองแบบเจือจาง 40 เท่า ซึ่งสามารถใช้เพื่อระบุได้อย่างแม่นยำว่าได้เพิ่มเทมเพลตลงในของไหลของปฏิกิริยา qPCR หรือไม่โดยการเปลี่ยนสีของของเหลวใช้ระบบปฏิกิริยา 20ul qPCR เป็นตัวอย่าง ตามปริมาณแม่แบบการเจือจางที่เพิ่มลงในสารละลายปฏิกิริยา 20ul qPCR วิธีการเจือจางที่สอดคล้องกันของแม่แบบดั้งเดิมสามารถอ้างถึงตารางต่อไปนี้ (ยกตัวอย่างแม่แบบดั้งเดิมที่เจือจางเป็น 100ul เป็นตัวอย่าง ):

ตัวอย่าง:

ควรเพิ่มแม่แบบเจือจาง 2ul ลงในระบบปฏิกิริยา 20ul qPCR

ยกตัวอย่างระบบ 100ul Template Dilution เมื่อปริมาตรเทมเพลตดั้งเดิมคือ 20ul จะมีการเพิ่มบัฟเฟอร์การเจือจางเทมเพลตสีเหลือง 25ul 40x จากนั้นจึงเติมน้ำที่ปราศจากนิวคลีส 55ul ลงในปริมาตรรวม 100ul

40x YELLOW TEMPLATE DILUTION BUFFER ตอนนี้เป็น 10xเพิ่มเทมเพลตเจือจาง 2ul ใน 20ul Dilution Dilution Buffer และ 40 × YELLOW Template Dilution Buffer สุดท้ายคือ 1xโดยสรุป บัฟเฟอร์การเจือจางเทมเพลตสีเหลืองควรเป็น 1x ในระบบ qPCR สุดท้าย

ข้อมูลผลิตภัณฑ์ของ Universal TaqMan multiplex qPCR master mix:

สภาวะการจัดเก็บและการจัดการด้วย Universal TaqMan multiplex qPCR master mix:

การขนส่งถุงน้ำแข็งเปียกเก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส มีอายุ 12 เดือน

บันทึก:ถ้าแม่แบบไม่จำเป็นต้องเจือจาง หรือถ้าไม่ใช้ตัวเจือจางแม่แบบของ G3362-2 คุณสามารถข้ามขั้นตอนนี้ได้

2.ขั้นตอนการทำปฏิกิริยา PCR (สามารถปรับได้ตามเครื่องมือ) :

a: หากจำเป็นต้องปรับปรุงความจำเพาะของการขยายเสียง สามารถใช้ขั้นตอนสองขั้นตอนหรืออุณหภูมิการหลอมได้เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายเสียง สามารถใช้ขั้นตอนสามขั้นตอนหรือขยายเวลาได้

บันทึก:

1. โปรดสวมถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งระหว่างการทำงานเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน RNase

2. ผลิตภัณฑ์การถอดความแบบย้อนกลับสามารถเก็บไว้ที่ -20 ℃ ในช่วงเวลาสั้นๆหากต้องการเก็บรักษาในระยะยาว ขอแนะนำให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80 องศาเซลเซียสหลังการบรรจุ เพื่อหลีกเลี่ยงรอบการแช่แข็งและละลายซ้ำ

3. หากแม่แบบมีต้นกำเนิดจากยูคาริโอต ขอแนะนำให้เลือก Oligo (dT)18 Primer และจับคู่กับหางโพลีเอ 3' ของ eukaryotic mRNA เพื่อให้ได้ cDNA แบบเต็มความยาวสูงสุด

4. สำหรับการถอดรหัสย้อนกลับของ prokaryotic RNA ควรใช้ Random Hexamer Primer หรือ Gene Specific Primer

5. Random Hexamer Primer ใช้งานได้หลากหลายและเหมาะสำหรับเทมเพลต mRNA, rRNA, tRNA, RNA ขนาดเล็ก และ lncRNA

6. หากการถอดรหัสย้อนกลับตามด้วยการทดสอบ qPCR จะสามารถผสมรองพื้น Oligo (dT)18 และ Random Hexamer Primer เพื่อทำให้ประสิทธิภาพการสังเคราะห์ cDNA ในทุกภูมิภาคของ mRNA เท่ากันได้ ซึ่งจะช่วยปรับปรุงความถูกต้องและความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์เชิงปริมาณ

7. หากไพรเมอร์ qPCR ที่ตามมาได้รับการออกแบบข้าม exons สามารถละเว้นขั้นตอนการกำจัดจีโนมได้

ปัญหาและแนวทางแก้ไขทั่วไป:

หากคุณต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ Universal TaqMan multiplex qPCR master mix โปรดแจ้งให้เราทราบทางออนไลน์ ขอขอบคุณ